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實時熒光定量PCR(qPCR)三個主要階段介紹
日期:2025-05-10 02:18
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摘要:
實時熒光定量PCR(qPCR)的基本原理包括三個主要階段,這些階段反映了PCR擴增過程中的熒光信號變化:
1、基線期:在PCR反應開始時,熒光信號幾乎不變,主要是因為背景熒光的存在掩蓋了PCR產(chǎn)物的熒光信號。這一階段的熒光信號變化不大,接近一條直線,用于設置基線。
2、指數(shù)期:隨著PCR循環(huán)的進行,目標DNA序列被指數(shù)級擴增,熒光信號隨之增加。這一階段熒光信號呈指數(shù)增長,PCR產(chǎn)物量與起始模板量呈線性關系,是進行定量分析的理想階段。
3、平臺期:當PCR反應接近完成時,由于DNA聚合酶活性下降、底物耗盡或抑制...
實時熒光定量PCR(qPCR)的基本原理包括三個主要階段,這些階段反映了PCR擴增過程中的熒光信號變化:
1、基線期:在PCR反應開始時,熒光信號幾乎不變,主要是因為背景熒光的存在掩蓋了PCR產(chǎn)物的熒光信號。這一階段的熒光信號變化不大,接近一條直線,用于設置基線。
2、指數(shù)期:隨著PCR循環(huán)的進行,目標DNA序列被指數(shù)級擴增,熒光信號隨之增加。這一階段熒光信號呈指數(shù)增長,PCR產(chǎn)物量與起始模板量呈線性關系,是進行定量分析的理想階段。
3、平臺期:當PCR反應接近完成時,由于DNA聚合酶活性下降、底物耗盡或抑制物積累,擴增效率降低,熒光信號的增加趨于平緩,zui終停止。這一階段熒光信號不再顯著增加,PCR產(chǎn)物達到飽和狀態(tài)。
在指數(shù)期,通過設定熒光閾值(閾值循環(huán)數(shù),Ct值),可以準確地對樣品中的初始模板量進行定量分析。Ct值越小,說明初始模板量越大。利用標準曲線,可以將Ct值轉換為模板的起始拷貝數(shù),實現(xiàn)對目標序列的定量檢測。